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ATTO AB-2550 Kronos Dio的应用–药物递送系统

信息来源:www.sddysc.cn  |   发布时间:2021年09月18日

药物传递系统(DDS)的概念出现在20世纪70年代初,80年代开始成为制剂研究的热门课题。60年代生物药剂学和药物动力学的崛起可以测定药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄的定量关系,以及药物的生物利用度。药物在体内过程的研究结果为新剂型的开发研究提供了科学依据。

SiRNA药物抑制疾病相关蛋白质的合成,是目前广大研究者的兴趣所在。然而,siRNA的低生物药效率阻碍着它向临床医学转变。在不断提升siRNA效率努力下,催生了各种形式的携带siRNA的纳米粒子载体。

在这个工作中,我们得到一种聚离子复合物胶束,由胆固醇和二硫化物交联固定,全身给药法将siRNA转移至实体瘤。

随后,为了检测该胶束的靶向性,我们利用荧光素酶表达颈肿瘤细胞系(Hela-Luc)。活体状态下全身给药,在鼠科皮下肿瘤内,借助荧光素酶基因沉默活性,评估siRNA的递送效率。


方法

Hela-Luc细胞种在35mm的培养皿内(25,000细胞/皿),含有10%FBS2ml DMEM中培养24h。然后,换液2ml,内含100uM的荧光素和胶束样品(200nM siRNA)。对照组是用5Mm HEPES bufferph7.4)处理。样本放置于Kronos细胞实时基因表达及分析系统内(ATTO 公司,日本)37,5%CO2,荧光强度实时检测超过50小时。注:提高转染效率可用日本BEX公司的电转化仪CUY21EDIT II


图2 利用动态光散射来检测PEG-PLL(MPA)聚离子和siRNA混合物的稳定性。空心圆:无CholsiRNA;实心圆:Chol-siRNA。A)在不同+:-比例下,混合物的SLI; B)混合物的加权亮度直方图。此处推荐使用IZON公司的qNano纳米粒子计数仪检测纳米载体的大小和稳定性。

图3活体荧光素酶分析

样品放置在Kronos细胞实时基因表达及分析系统内(ATTO公司,日本)37℃,5%CO2,荧光强度实时检测超过50小时。


最终,阐明这种聚离子复合物胶束能高效地递送siRNA进入靶标肿瘤。

小结:Kronos细胞实时基因表达及分析系统(ATTO 公司,日本),可以长时间连续检测活细胞内基因表达水平变化。标记物荧光素酶连接在目标siRNA后面,整合到聚离子胶束上面,借助BEX电转化仪导入到颈肿瘤细胞内。稳定表达后,培养在35mm培养皿内,放置在AB2550的样品盘内,盖上箱盖,内部形成一个控温保湿通气的培养箱系统。在软件中,设定总时长和间隔时间,运行软件,记录数据。

AB2550采用荧光素酶标记,酶和底物结合发出荧光。对细胞没有伤害,只要有底物,细胞就会发光。较之荧光蛋白标记要安全地多。而且ATTO公司专利的分色系统,可以满足用户一次添加底物,同时监测三种荧光,也就是同时监测三个基因的表达水平变化。

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