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CUY21 EDIT II电转仪介导微注射用于非胚胎阶段中华按蚊核酸传递

信息来源:www.sddysc.cn  |   发布时间:2021年09月22日

今天和大家分享一篇重庆师范大学生命科学院陈斌,乔梁老师课题组在Insect Biochemistry and Molecular Biology2020年影响因子/JCR分区:3.827/Q2;top5%)上发表的电穿孔介导的核酸传递用于非胚胎阶段中华按蚊(Anopheles sinensis)基因功能的文章,研究表明电穿孔介导的核酸传递系统应用于中华按蚊可简单、快速实现基因沉默,靶向体细胞转基因和种系转基因,也为其他小型非模式昆虫的功能基因组学研究提供新的技术参考。

通过显微注射技术将外源核酸转染到卵或非胚胎个体中是一种常用且十分重要的反向遗传学技术,常用于确定哺乳动物,昆虫,鱼类的基因功能。然而将DNA传递到某些小型非模式化昆虫(如:中华按蚊)卵中较为复杂、费时,且常规的非胚胎注射技术也可能会导致靶标活体部位及组织细胞对核酸片段的吸收不足,从而导致表型不明显。乔梁老师课题组研究中开发了一套电穿孔介导的非胚胎显微注射剂,可用于在中华按蚊及小型非模式昆虫中传递外源核酸。


实验使用微量毛细玻璃管将质粒分别注入按蚊特定身体部位及交配后雌性按蚊卵巢附近,采用CUY21EDIT II(BEX,Japan)电转仪及铂金针式电极(电极长2cm,间距1mm-1cm可调节)进行电转染。

实验表明电穿孔可有效提高基因沉默效率及组织特异性,对照组的所有个体基因表达水平仅下降 25.3%, 而在RNAi突变体中目标基因沉默效率可达到85%。

图2. RNAi电穿孔与非电穿孔对照组沉默效应的比较

通过电穿孔介导的微注射同时可以靶向个体的体细胞表达,电击完成后外源基因在按蚊若虫体内表达,若虫体色变浅可观察到荧光信号,部分个体成虫后翅及部分肢体也可观察到一定荧光信号。