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CUY21 EDIT II应用于原代皮质神经前体细胞(CPCs)转染的文章发表于Cell Signalling

信息来源:www.sddysc.cn  |   发布时间:2021年09月27日

日本大阪大学Kazuaki Yoshikawa 于2015年12月在Cell Signalling上发表文章, 阐述necdin是EGFR/ERK信号通路的内在抑制因子。试验中所有的细胞转染实验均采用BEX CUY21 EDIT II进行操作,并对原代皮质神经前体细胞(CPCs)转染的细节进行的详细的描述。

 

Necdin controls EGFR signaling linked to astrocytedifferentiation in primary cortical progenitor cells

摘要

细胞信号介导的EGF受体在皮质神经前体细胞(CPCs)的分化增殖的过程中扮演极其关键的角色。然而,EGFR信号通路在CPCs中的调控机制目前没有深刻的了解。这里我们阐述了一种生长抑制蛋白necdin(黑素瘤相关抗原家族Ⅱ成员),在星状胶质细胞分化过程中,参与原代CPCs细胞的EGFR互作并抑制下游信号通路转导。

方法和材料

体外转染实验

从E14.5的孕鼠中分离原代皮质神经前体细胞(CPCs)并培养48h。5X10CPCs离心收集并用100ul Opti-MEM重悬,(含表达载体20ug)。电转参数为Pp:125V/10ms;Pd:20V/50mson/50ms off;10 cycles)。2mm gap电极杯,应用电转化仪CUY21EDIT II, BEX。添加有FLAG标签的人类MAGEA1,和td-Tomato(ptdTomato-N1质粒)转染入原代CPCs,转染效率在12h后达到约70%。针对于GFAP表达,转染后的CPCs在CPC培养基中培养24h之后,用CT-1(50ng/ml)处理48h。然后借助于免疫印迹和应用免疫化学方法进行观察。

结果



图2.自体磷酸化EGFR和necdin共定位于CPCs

(A,B)免疫组化。CPCs分别用EGF+和不含EGF处理5min。(C)3D分析。(D)共同免疫沉淀法。

讨论

通过EGFR和necdin在原代CPCs中共表达发现,Necdin通过络氨酸激酶domain结合于自磷酸化的EGFR中。在necdin缺失CPCs中,EGFR/ERK信号通路通过增加和EGFR、Grb2互作得到激活。这些结果说明,necdin是EGFR/ERK信号通路的内在抑制因子。


如需要相关仪器信息,请联系北京倍辉科技有限公司info@bio-sun.com.cn


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