日本大阪大学Kazuaki Yoshikawa 于2015年12月在Cell Signalling上发表文章, 阐述necdin是EGFR/ERK信号通路的内在抑制因子。试验中所有的细胞转染实验均采用BEX CUY21 EDIT II进行操作，并对原代皮质神经前体细胞（CPCs）转染的细节进行的详细的描述。

Necdin controls EGFR signaling linked to astrocytedifferentiation in primary cortical progenitor cells

摘要

细胞信号介导的EGF受体在皮质神经前体细胞（CPCs）的分化增殖的过程中扮演极其关键的角色。然而，EGFR信号通路在CPCs中的调控机制目前没有深刻的了解。这里我们阐述了一种生长抑制蛋白necdin（黑素瘤相关抗原家族Ⅱ成员），在星状胶质细胞分化过程中，参与原代CPCs细胞的EGFR互作并抑制下游信号通路转导。

方法和材料

体外转染实验

从E14.5的孕鼠中分离原代皮质神经前体细胞（CPCs）并培养48h。5X106 CPCs离心收集并用100ul Opti-MEM重悬，（含表达载体20ug）。电转参数为Pp：125V/10ms；Pd:20V/50mson/50ms off；10 cycles）。2mm gap电极杯，应用电转化仪CUY21EDIT II， BEX。添加有FLAG标签的人类MAGEA1，和td-Tomato（ptdTomato-N1质粒）转染入原代CPCs，转染效率在12h后达到约70%。针对于GFAP表达，转染后的CPCs在CPC培养基中培养24h之后，用CT-1（50ng/ml）处理48h。然后借助于免疫印迹和应用免疫化学方法进行观察。

结果

图2.自体磷酸化EGFR和necdin共定位于CPCs

（A,B）免疫组化。CPCs分别用EGF+和不含EGF处理5min。（C）3D分析。（D）共同免疫沉淀法。

讨论

通过EGFR和necdin在原代CPCs中共表达发现，Necdin通过络氨酸激酶domain结合于自磷酸化的EGFR中。在necdin缺失CPCs中，EGFR/ERK信号通路通过增加和EGFR、Grb2互作得到激活。这些结果说明，necdin是EGFR/ERK信号通路的内在抑制因子。

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