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产品名称: RNA质控,1+1>3
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发布时间: 2021-12-27
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1小编心里话:RNA质控是个技术活儿!


   对于每天泡在实验室的人来说,qPCR已是家常便饭。毫无疑问浓度高,纯度好,片段完整,才是我们理想中的RNA样品。然而,RNA总是娇气的存在!室温或4度极易降解,提取的时候容易有污染物残留。因此完整的RNA质控包含了三个方面:浓度质控,纯度质控,片段完整性质控。



2如何把控RNA质量,继续反转录呢?


    有一款RNA质控的高手,既可以提供RNA浓度质控,也可以提供RNA纯度质控,没错,就是美国Denovix公司独家提供的DS-11FX超微量紫外/荧光全功能分光光度计,看上去酷酷的!


RNA纯度质控的标准方法是超微量分光光度计(光吸收)法,通过监控A260/230和A260/280的比值来判定RNA的纯度。通常A260/280的比值范围在1.8-2.0之间,如果大于2.0则说明RNA已经降解,如果低于1.8则说明含有蛋白质或其他杂质;而A260/230的比值如果小于2,则表明RNA中含有酚类,盐等杂质。DS-11FX的微量光度计功能可以帮助科研人员来准确的判定RNA样品的纯度。

 

    下图为RNA紫外法检测示意图,A260/280和A260/230都不在正常的比值范围,说明RNA样品纯度很差,仪器会自动进行提示,两个黄色小三角就是警示图标哦,点击萌萌的黄色三角警示,仪器会显示污染物的种类,够智能吧,这就是DS-11特有的SmartQC功能。

RNA浓度质控的标准方法是荧光法,除非是纯度很高的RNA也可以采用紫外法。荧光法采用RNA特异性染料,可以准确的测量RNA浓度。DS-11FX不但提供RNA浓度质控,也可以提供DNA和蛋白的浓度准确控制,功能超级强大哦。


  下图展示发表在Cell stem cell的文章PAX3 Confers Functional Heterogeneity in Skeletal Muscle Stem Cell Responses to Environmental Stress,作者提取卫星细胞的总RNA,采用DS-11FX超微量/荧光全功能分光光度计进行RT-PCR之前的RNA的质量把控和浓度鉴定。


RNA片段完整性质控最常用的是核酸蛋白片段分析仪(Qsep系列毛细管电泳仪)

RNA样本即使检测到较高浓度,也不代表核酸片段就是完整的,因为碎碎的小片段也可以结合染料。不能只做浓度纯度检测,片段完整性也是评判样本质量的关键点,RNA样品的降解会是下游实验失败的一个重要原因。

 

自信满满的Qsep系列毛细管电泳仪不仅可以清晰地对28S/18S(或者23S/16S)进行电泳分离,还可以根据检测出的片段分布情况给出完整性评分值RQN,数值越接近10代表样本完整性越好。除了峰图,Qsep还可给出28S:18S比值和DV200值作为参考,再轻微的降解也逃不过Qsep的火眼金睛。



    综上,DS-11FX紫外/荧光结合Qsep可以提供很好的RNA质控,国内大量著名高校及企业如北京大学,复旦大学,上海交大,浙江大学,中山大学,四川大学,诺禾,金域等等都开始采用领先的1+1RNA质控方案。质控新思路,欢迎您的加入。




(此内容由www.sddysc.cn提供)

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